本文目录一览：
- 1、高中生物基因工程，正反两种结构是指怎样连接？
- 2、第二题中，什么是目的基因与载体之间的反向连接，为什么避免这个可以提高重组质粒的比例？
- 3、什么叫做目的基因与质粒反向连接（2012江苏生物卷基因工程题最后一空）
- 4、基因反向连接
- 5、如何是目的基因的自我环化和反向连接
- 6、质粒与目的基因为什么会反向连接
高中生物基因工程，正反两种结构是指怎样连接？
因为同种限制酶切割,产生的黏性末端相同，即目的基因两端暴露出来的碱基序列相同,与质粒相连时,若目的基因的正确碱基序列由左到右,则与质粒连接为正确连接。由于目的基因两州黏性末端相同,可以造成右侧连上（说简单点,就是启动子位置改变)这就是反向相连.
第二题中，什么是目的基因与载体之间的反向连接，为什么避免这个可以提高重组质粒的比例？
目的基因具有从起始密码子到终止密码子的方向性，必须正向连接才能获得正确克隆，构建的载体才能正确表达目的蛋白。
什么叫做目的基因与质粒反向连接（2012江苏生物卷基因工程题最后一空）
同种酶酶切 两端的粘端相同 这样子目的基因有可能正向插入载体 也可能反向插入 （目的片段两个方向都能与载体连接）
但是只有一个方向是正确的
基因反向连接
限制酶的识别位点大多是反向对称的,如果只用用同种酶切,所得片段的2端序列相同,在连接时,是随机连接,不仅会出现反向连接,而且会出现片段串联.
在分子克隆实验中,我们会用两种酶分别切目的基因和质粒的上下游,这样就保证了目的片段和质粒片段在连接时的方向性,如上游都用EcoR I,下游都用BamH.
你所理解的“目的基因与质粒不就是本应该用同一种限制酶切割”,指的就是两者上游同用一种,下游又同用另一种,而不是指上下游都用同一种酶切.
除非是某些特殊情况,不得不用一种酶切上下游,这样会出现大量的反向连接,连接后,需要多挑些克隆鉴定.
个人见解,仅供参考,祝好!
如何是目的基因的自我环化和反向连接
双酶切.
在基因两端分别用不同的内切酶来酶切,
载体上也用这两种酶来酶切.这样自己的酶切位点只能识别自己的位点,
就不会发生基因方向的错误了.
而且载体的两个位点互相不识别,也不会自连接.
质粒与目的基因为什么会反向连接
质粒有自己的阅读顺序，如果目的基因反向连接进去的话，按照质粒的阅读顺序，已经不是目的基因了，倒过来看才是目的基因，当然不能表达出目的基因的蛋白质